| 目的 探讨连翘脂素是否通过抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导结肠癌HCT116细胞凋亡和焦亡。方法 在体外实验中,选用人结肠癌细胞HCT116进行实验,运用CCK-8法、流式细胞仪检测连翘脂素对HCT116细胞存活率、凋亡率的影响并筛选连翘脂素的最适浓度,观察细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡、焦亡等表型变化。采用JC-1染色观察HCT116细胞线粒体膜电位变化,采用蛋白质印迹法(Westernblotting)、酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)、定量逆转录聚合酶链反应(quantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction,qRT-PCR)检测连翘脂素对HCT116细胞凋亡和焦亡相关蛋白表达、炎性因子表达等指标的影响,并使用平板克隆实验、划痕实验、Transwell实验检测 HCT116细胞增殖、侵袭、迁移能力。在体内实验中,构建结肠癌裸鼠成瘤模型,分为对照组和实验组各5例,对照组注射0.1%DMSO溶液,实验组注射含最适浓度的连翘脂素的0.1% DMSO溶液,观察裸鼠瘤体大小、体重、生存情况及瘤体组织相关蛋白表达和炎性因子活性。结果 连翘脂素对HCT116细胞的最适加药浓度为20μmol/L。连翘脂素显著抑制HCT116细胞的克隆形成率、细胞侵袭个数和划痕愈合率(IC50为10.75~18.80μmol/L),并诱导细胞凋亡和焦亡,表现为Bax、cleavedCaspase-3、cleavedPARP、GSDME-N、cleavedIL-1β蛋白、IL-1β、IL-18、IL-1βmRNA 和IL-18mRNA表达显著高于对照组(P<0.05),Bcl-2、β-catenin、c-Myc、MMP2蛋白表达显著低于对照组(P<0.05)。结论 连翘脂素能够通过抑制 Wnt/β-catenin信号通路诱导结肠癌HCT116细胞凋亡和焦亡,为连翘脂素类抗肿瘤药物的开发提供理论依据和实验支持。 |